Исследователи, изучающие внеклеточные везикулы (ВВ), часто сталкиваются с проблемами, связанными со стандартизацией, воспроизводимостью и чувствительностью. Надежные инструменты и высококачественные реагенты необходимы для совершения прорывных открытий в сложной области межклеточной коммуникации.
Тромбоциты, хотя и являются небольшими клеточными фрагментами в крови, содержат богатые биологически активные материалы и играют решающую роль в генерации экзосом и функциональной регуляции. Экзосомы, полученные из тромбоцитов человека, были тщательно получены от здоровых доноров и выделены и очищены с использованием современных методов тангенциальной проточной фильтрации (TFF) и эксклюзионной хроматографии (SEC). Эти экзосомы сохраняют присущие им биологические свойства, что делает их идеальными для изучения функций ЭВ, служат положительным контролем и калибровкой аналитических методов.
Чтобы максимизировать активность и стабильность экзосом, усовершенствованный процесс лиофилизации эффективно удаляет влагу, продлевая срок хранения до 24 месяцев без необходимости строгого хранения в холодильной цепи (рекомендуется хранить при 4°C). Эта долгосрочная стабильность упрощает планирование экспериментов и управление запасами, обеспечивая при этом постоянный доступ к высококачественным исследовательским материалам.
Эти лиофилизированные экзосомы служат надежным положительным контролем при использовании нескольких методов анализа EV. Ниже приведены рекомендуемые рекомендации по использованию (могут потребоваться корректировки в зависимости от конкретных условий эксперимента):
| Техника нанесения | Рекомендуемое количество |
|---|---|
| Флуоресцентный анализ отслеживания наночастиц (F-NTA) | 1 мкг |
| Проточная цитометрия | 5 мкг |
| ИФА | 10-20 мкг/лунка |
| Вестерн-блоттинг | 10-20 мкг/дорожка |
ЭВ, выделенные ультрацентрифугированием и TFF, окрашивали с использованием набора F-NTA EV Tetraspanin Detection Kit и анализировали с помощью ZetaView® x30, демонстрируя точную наноразмерную характеристику. Дополнительная проверка с использованием реагентов для обнаружения CD9, CD63 и CD81 F-NTA подтвердила специфические закономерности экспрессии маркеров в ЭВ, полученных из тромбоцитов.